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Fortschritte bei molekularen Diagnosemethoden für zirkuläre RNA

Zirkuläre RNA (circRNA) ist ein einzigartiger Typ nicht-kodierender RNA, der durch Rückspleißen von mRNA entsteht, um die kovalente Verbindung ohne 3′-5′-Polarität und Poly(A)-Schwanz zu bilden. CircRNA wurde erstmals vor etwa 30 Jahren entdeckt und galt als Nebenprodukt abnormalen Spleißens ohne regulatorische Funktion. Im Jahr 2013 wurde der regulatorische Mechanismus von circRNA als miRNA-Schwamm beschrieben, was einen neuen Weg für die circRNA-Forschung eröffnete.

Mit der Entwicklung von Nachweistechnologien wurde eine große Anzahl von circRNAs in Organismen identifiziert und ihre biologischen Funktionen und Mechanismen wurden nach und nach aufgedeckt. Insbesondere circRNAs werden abnormal exprimiert und spielen eine entscheidende Rolle bei vielen Krankheiten, darunter Magenkrebs, Leberzellkarzinom und Brustkrebs.

In einer Studie (doi: https://doi.org/10.1016/j.bioana.2024.11.002) , die im KeAi-Journal Biomedical Analysis veröffentlicht wurde , untersuchte eine Gruppe chinesischer Forscher die Fortschritte bei der spezifischen und empfindlichen Erkennung von circRNAs. Sie beschrieben die Prinzipien dieser Technologien, diskutierten die Vorteile und Grenzen dieser Methoden und hoben die Durchbrüche der isothermen Amplifikation, CRISPR und des digitalen Droplets-Assays hervor.

Die am häufigsten verwendeten Methoden zum Nachweis von circRNA sind RNA-Sequenzierung und RT-PCR. „Die RNA-Sequenzierung kann die tatsächliche Struktur enthüllen und neue circRNA entdecken, ist jedoch ineffizient und übersieht daher tendenziell circRNA mit geringer Häufigkeit“, erklärt Wang. „Außerdem ist sie teuer und kompliziert durchzuführen.“

Das Team betonte, dass RT-PCR zwar der Goldstandard für die Validierung von circRNA ist, die Expression jedoch aufgrund der besonderen Struktur von circRNA überschätzen kann.